LE LBM DE L’ETABLISSEMENT FRANÇAIS DU SANG BRETAGNE EST L’UN DES 13 LBM DE L’EFS SUR LE TERRITOIRE NATIONAL MÉTROPOLITAIN.

http://www.efs.sante.fr/lbm-bretagne

Cet outil présente les examens réalisés par le LBM de L’EFS BRETAGNE et décrit ses exigences relatives aux prélèvements d’échantillons sanguins destinés à ces examens et aux documents administratifs qui doivent les accompagner. En effet, la phase pré-analytique est une étape fondamentale qu’il convient de bien réaliser, l’analyse des accidents transfusionnels ayant montré la fréquence élevée d’erreurs d’identification au moment du prélèvement ou encore d’usurpation d’identité.

Objet de domaine d'application

Ce manuel de prélèvement a pour objectif de présenter le LBM de l’EFS Bretagne et les examens réalisés par les pôles d’Immuno-Hématologie Erythrocytaire et d’Immunogénétique et Histocompatibilité-immunologie leuco-plaquettaire (HLA : human leukocyte antigen/HPA : human platelet antigen /HNA : human neutrophil antigen), ainsi que d’en recenser les exigences. Il présente d’autre part les modalités de fonctionnement du laboratoire, de transport des échantillons et de transmission des comptes rendus de résultats d’examens

Le LBM de l'EFS BRETAGNE

Le LBM EFS-BRETAGNE est accrédité COFRAC, selon la norme 15189, version 2012 (N° d’accréditation : 8-1949). La liste des sites, les portées d’accréditation ainsi que la portée détailéée du LBM EFS-BRETAGNE sont disponibles sur http://www.cofrac.fr 

Le LBM EFS Bretagne est constitué : De 6 laboratoires IHE (Immuno-Hématologie Erythrocytaire) avec une activité de biologie moléculaire des Groupes Sanguins sur le site de Brest et d’un laboratoire HLA/HPA/HNA sur le site de Rennes.

Examens réalisés

• Groupage sanguin ABO-RH1/Phénotypage RH-KEL1
• Recherche de sous-groupe ABO
• Phénotypage érythrocytaire étendu (FY1 FY2 JK1 JK2 MNS3 MNS4)
• Phénotypage érythrocytaire élargi (RH8, LE1, LE2, LU1, LU2, KEL2, KEL3, KEL4, MNS1, MNS2, P1)
• Recherche d’anticorps irréguliers anti-érythrocytaires (RAI) : dépistage / identification
• EDA (Examen Direct à l’antiglobuline)
• EDA élargi (IgG, IgM, IgA, C3c, C3d)
• Recherche et titrage d’anticorps anti-A, anti-B immuns
• Titrage d’anticorps naturels anti-A, anti-B
• Titrage d’anticorps immuns anti-érythrocytaires autres que anti-ABO
• Microtitrage d’anticorps anti-RH1
• Epreuve directe de compatibilité érythrocytaire (EDC)
• Test de Kleihauer (recherche d’hématies fœtales)
• Recherche et titrage d’agglutinines froides
• Bilan d’anémie hémolytique auto-immune
• Bilan d’anémie hémolytique d’origine médicamenteuse
• Bilan d’incident transfusionnel
• Génotypage RH1 fœtal sur sang maternel

Les examens sont effectués, selon les cas, en technique manuelle ou automatisée par des méthodes d’hémagglutination sur support jetable, en microplaque ou en carte gel de microfiltration. Le laboratoire peut être amené à mettre en œuvre des techniques et/ou examens complémentaires nécessaires, le cas échéant.

Le laboratoire transmet systématiquement au Centre National de Référence pour les Groupes Sanguins (CNRGS) les confirmations de phénotype érythrocytaire rare pour inscription au fichier national des patients présentant un phénotype érythrocytaire rare ainsi que certaines RAI complexes avec présence d’anticorps dirigé contre un antigène de haute fréquence.

Le laboratoire transmet à l’EFS Ile de France – site de St Antoine les demandes d'EDA élargi (-IgG, -IgM, -IgA,C3c, C3d) ainsi que les recherches d’anticorps anti-médicaments dans les cas de suspicion d’anémies hémolytiques d’origine médicamenteuse. L’indication de ce dernier doit impérativement être validée en amont après concertation entre le prescripteur et le biologiste de l’EFS St Antoine.

   Le laboratoire transmet au CHU de RENNES les tests de Kleihauer à réaliser en cytométrie en flux lorsque le résultat obtenu en technique colorimétrique est ininterprétable.

   Le laboratoire transmet au CNRHP les examens de suivi de grossesse (Dosage pondéral, titrage) dès lors qu’un anticorps d’intérêt obstétrical nécessite un suivi spécifique.

   Le laboratoire transmet les demandes de génotypages fœtaux RH1 sur sang maternel au LBM de l’EFS Hauts-de- France-Normandie site de Lille.

   Les échantillons sont conservés entre 2 et 8°C     pendant 7 jours au laboratoire, puis suivent la filière d’élimination des DASRI (Déchets d’Activités de Soins à Risques Infectieux) mise en place en conformité avec la réglementation.

Sont réalisés dans le secteur de biologie moléculaire des groupes sanguins :

  -Le génotypage des systèmes:

• Rhésus
• Kell
• Duffy
• Kidd
• MNS
• Lutheran
• Diego
• Colton
• Dombrock
• Landsteiner-Wiener

 -La recherche de variants RHD, RHCE et la détermination de zygotie RHD

   Les examens sont effectués par typage de SNP (Single Nucleotid Polymorphism) connu(s), en technique par hybridation sur puce à ADN ou séquençage Sanger selon les cas. Le laboratoire     mettra en œuvre les techniques et/ou examens complémentaires nécessaires, le cas échéant.

Sont réalisés dans le laboratoire d’Immunogénétique et Histocompatibilité – Immunologie leucoplaquettaire (HLA/HPA/HNA)

• Dépistage et identification d’anticorps anti-HLA classe I et classe II IgG
• Dépistage des anticorps IgG et IgM anti-lymphocytes B et T lymphocytotoxiques
• Génotypage HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DRB3, HLA-DRB4, HLA-DRB5, HLA-DQA1, HLA-DQB1, HLA-DPA1, HLA-DPB1
• Typage antigènes HLA-A, HLA-B, HLA-DR, HLA-DQ
• Cross match leucocytaire en microlymphocytotoxi-cité et cytométrie en flux
• Dépistage et identification d’anticorps anti-plaquettes (auto-anticorps, allo-anticorps, iso-anti-corps, quantification anticorps anti-HPA-1a, identification anticorps anti-HPA-15)
• Génotypage HPA-1, HPA-2, HPA-3, HPA-4, HPA-5, HPA-6, HPA-9, HPA-15 et autres systèmes HPA rares
• Génotypage nouvel antigène HPA
• Chimérisme
• Anticorps anti-granulocytes neutophiles (HNA)
• Bilan de compatibilité donneur/patient pré-greffe de cellules souches hématopoïétiques et suivi post-greffe immunologique
• Bilan pré-greffe d’organe donneur/patient et suivi post-greffe immunologique
• Bilan de thrombopénie néonatale et d’incompatibilité fœto-maternelle plaquettaire
• Diagnostic prénatal : génotypage HPA fœtal
• Bilan de thrombopénie auto-immune
• Bilan d’inefficacité transfusionnelle plaquettaire et identification des concentrés plaquettaires compatibles
• Bilan de suspicion de TRALI (Transfusion Related Acute Lung Injury)
• Bilan de purpura post-transfusionnel
• Bilan de réaction fébrile non hémolytique post-trans­fusionnelle
• Bilan de réaction du greffon contre l’hôte post-trans­fusionnelle
• Bilan HLA et susceptibilité génétique à certaines pathologies
• Bilan HLA et pharmacogénétique (abacavir, allopurinol)

Le laboratoire utilise les techniques suivantes selon les cas pour réaliser les examens cités : techniques de biologie moléculaire (Séquençage Sanger, PCR temps réel, PCR-SSP, NGS)         microlymphocytotoxicité, cytométrie en flux, MAIPA, technique Luminex. 

Le laboratoire peut être amené, de façon ponctuelle, à transmettre certains examens au LBM de l’EFS Île-de-France site de Créteil en cas de recherche d’anticorps anti-granuleux et de typage HNA.

Les échantillons sont conservés pendant 7 jours puis suivent la filière d’élimination des DASRI mise en place en conformité avec la réglementation.

Une biothèque (DNAthèque, sérothèque cellulothèque) est conservée dans le cadre de la greffe pour assurer le suivi du patient en accord avec la réglementation.

Le laboratoire est accrédité EFI (European Federation for Immunogenetics), recommandée pour la greffe d’organe et exigée par l’accréditation JACIE.

Le laboratoire a l’autorisation de l’ARS pour la réalisation de l’activité d’examens des caractéristiques génétiques d’une personne à des fins médicales (HPA, HPA) ainsi que pour le diagnostic prénatal (HPA) : trois biologistes sont agréés.

   Heures d'ouverture et de fermeture des laboratoires

Les laboratoires d’Immuno-Hématologie Erythrocytaire de l’EFS Bretagne sont ouverts 24h/24 7 jours/7. Les examens demandés notamment dans un contexte transfusionnel et périnatal, sont pris en charge en continu. Une astreinte biologique assurée par un biologiste médical et une astreinte de conseil transfusionnel assurée par un médecin sont mises en place 24H/24 et 7J/7.

Le secteur de biologie moléculaire des groupes sanguins effectue les examens précités de 9h à 17h, hors week-ends et jours fériés.

Le laboratoire d’Histocompatibilité et d’Immuno-génétique est ouvert de 8h30 à 18h du lundi au vendredi. Une astreinte technique ainsi qu’une astreinte biologiste pour assurer le conseil biologique sont en place 24h/24 et 7j/.